兽用消毒剂对病毒定量杀灭效果试验依据《兽用消毒剂鉴定技术规范》（农牧药字〔〕第号）设计；本试验遵从《兽药临床试验质量管理规范》（农业部公告〔〕第27号）实施。
试验病毒流感病毒、疱疹病毒、柯萨奇病毒、脊髓灰质炎病毒、轮状病毒、肠道病毒、合胞病毒、禽流感、猫瘟病毒、犬瘟病毒等
立即咨询第三方检测机构打开百度APP立即扫码下载立即拨打试验方法1细胞病毒悬液的制备
取冻存的××毒株，7℃水浴融化，用细胞维持液作10倍稀释，然后接种于已经长满单层××细胞的细胞瓶内，置于含5%二氧化碳的7℃培养箱中吸附感染1h，加入适量细胞维持液，继续培养至72h。将细胞反复冻融次，r/min离心15min，保留上清，上清液即为试验用病毒悬液。放-80℃冰箱备用。
2半数组织感染量（TCID50）的测定
参考中国兽药典年版（三部）附录进行检测。
单层细胞的准备：试验前24h将MDCK细胞传至96孔细胞培养板中，待细胞长至70～90%，移去孔中培养液，用DPBS（0.1M，pH7.）洗涤细胞，弃去洗液，重复洗涤次。将病毒悬液做10倍连续稀释，即10-1、10-2、10-……10-11，每个稀释度的病毒液接种至少个细胞孔，每孔加入μl病毒悬液，后置于7℃、5%二氧化碳的细胞培箱中培养。适时观察细胞病变效应（CPE），6h后将细胞固定，并做常规染色（先用10%福尔马林固定0min，然后置于用10%福尔马林配置的0.05%亚甲基蓝溶液中浸泡染色0min，最后将培养板用水冲洗）。未病变细胞呈蓝色，病变细胞不着色，根据CPE情况，按Reed-Muench法计算病毒TCID50。
距离比例=（大于50%的阳性百分比-50）/（大于50%的阳性百分比-小于50%的阳性百分比）
TCID50对数=大于50%的阳性百分比的最高稀释对数+距离比例×稀释系数的对数
其中：
“大于50%的阳性百分比”指阳性百分比高于50%的最低组的阳性百分比数值，“小于50%的阳性百分比”指阳性百分比低于50%的最高组的阳性百分比数值。
细胞中××病毒定量杀灭效果试验
（1）消毒剂与中和剂的中和产物对细胞的安全性评价
取0.5ml含××TCID50/ml的××病毒悬液于10ml试管内，分别加入4.5ml至少高、中（推荐使用浓度）、低三个稀释浓度的受试消毒剂及生理盐水（生理盐水为对照组），涡动混匀后置20℃水浴中作用5min；吸取上述混合液1.0ml加入已盛有9.0ml中和剂的试管内涡动混匀，中和10min。将经上述处理得到的各组样品用细胞维持液稀释10倍接种××细胞，0.1ml/孔，接种8孔，接种后置二氧化碳培养箱培养，连续观察h。了解细胞的生长状态。试验重复次。
对照组接种的细胞生长状态应正常。若某中和产物组接种的细胞生长状态与对照组无可见差异，则表明该浓度下的消毒剂经中和剂中和后对细胞生长无影响。
（2）消毒剂对××病毒的定量杀灭效果测定
吸取××TCID50/ml的××病毒悬液0.5ml加入10ml试管，分别加入4.5ml至少高、中（推荐使用浓度）、低三个稀释浓度的消毒剂及灭菌水（灭菌水为阳性对照组），同时另取5.0ml生理盐水加入10ml试管作为空白对照组，涡动混匀后置20℃水浴中，分别处理不同时间，吸取混合液1ml加入9ml中和剂，作用10min后，测定各组病毒滴度TCID50。
一、二类消毒剂该试验应至少重复10次，三类消毒剂应至少重复次。
兽用消毒剂对病毒定量杀灭效果试验结果判定试验结束后，统计各组病毒滴度的均值，按下述公式计算病毒灭活率：
病毒灭活率（%）=[(阳性对照组滴度-试验组滴度)/阳性对照组滴度]×
空白对照组病毒滴度应为0。病毒灭活率达99.9%以上才判定为该消毒液有效消毒浓度；若测试灭毒效能，其病毒灭活率达%。当低于此指标时，则应提高消毒剂的浓度或延长作用时间，重新作试验。
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